正确配置高效液相色谱仪流动相的四个要点

正确配置高效液相色谱仪流动相的四个要点
 

高效液相色谱仪的分离原理，主要依靠流动相和固定相对样品的吸附和脱附作用，那正确配置流动相，对于实验数据和分离效果有着至关重要的意义。

一、流动相配置注意事项

一般来说，溶剂的混合按体积比（v/v）或重量比（w/w）进行。溶液的体积因温度而变化，所以按重量比混合配置流动相，样品测定的重复性较好，但是操作繁琐，通常多为体积混合。

体积混合有三种方式，例如50%乙腈水溶液：

方式（1）：可以用量筒量取乙腈500ml，再量取水500ml，两种液体在瓶内充分摇晃混合。

方式（2）：可以先取500ml乙腈到1l容量瓶中然后用水定容。

方式（3）：可以先取500ml水到1l容量瓶中然后用乙腈定容。

这三种方式配置得到的流动相组成都是不同的，即使不考虑其他方面因素，保留时间也不会相同。一般情况推荐使用方式（1） 来配置流动相。

二、高效液相色谱仪对试剂的要求

试剂如甲醇，乙腈必须为色谱级纯，其他试剂也尽量使用色谱级纯，试剂标签上都会标有色谱级或hplc等字样。水为超纯水或者直接购买质量有保证的纯净水。

三、调节流动相ph值

采用反相色谱法分离弱酸（3≤pka≤7）或弱碱（7≤pka≤8）样品时，通过调节流动相的ph值，以抑制样品组分的解离，增加组分在固定相上的保留，并改善峰形的技术称为反相离子抑制技术。

（1）对于弱酸，流动相的ph值越小，组分的k值越大，当ph值远远小于弱酸的pka值时，弱酸主要以分子形式存在；分析弱酸样品时，通常在流动相中加入少量弱酸，常用50mmol/l磷酸盐缓冲液和1%醋酸溶液。

（2）对于弱碱，情况相反。分析弱碱样品时，通常在流动相中加入少量弱碱，常用50mmol/l磷酸盐缓冲液和30mmol/l三乙胺溶液。流动相中加入有机胺可以减弱碱性溶质与残余硅醇基的强相互作用，减轻或消除峰拖尾现象。所以在这种情况下有机胺（如三乙胺）又称为减尾剂或除尾剂。

四、含缓冲盐流动相的配制

配置缓冲盐使用的盐试剂也尽量使用色谱级纯，称样要精准，为了达到要求，选用合适量程的天平且每天使用前对天平校正。按要求配置好以后必须通过0.45μm或0.22μm滤膜过滤并超声脱气20min以上。注意：缓冲盐要临用新配。

以上是正确配置高效液相色谱仪流动相的四个要点，欢迎交流。