大鼠酸性成纤维细胞生长因子1(afgf-1)elisa试剂盒
酶联免疫吸附测定法 (enzyme-linked immunosorbent assay)，简称elisa，是用于检测体液中微量物质的固相免疫测定方法。它是一种特殊的试剂分析方法，是在免疫酶技术(immunoenzymatic
techniques ) 的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术。初是在1971年由瑞典学者engvail和perlmann，荷兰学者vanweerman和schuurs报道的一项新成果。elisa现在已成为目前分析化学领域
中的前沿课题 。
大鼠酸性成纤维细胞生长因子1(afgf-1)elisa试剂盒仪器和材料
1. 聚苯乙烯微量细胞培养板（平板, 40, 96孔）。
2. 酶联免疫检测仪
3. 辣根过氧化物酶羊抗兔igg, 工作稀释度1:1000。
4. 包被液:：0.05mol/l ph9.6碳酸缓冲液,4℃，保存, na2co3 0.15克, nahco30.293克,蒸馏水稀释至100 ml。
5. 稀释液：0.01mol/lph7.4 pbs－－tween－－20, 4℃，保存. nacl 8g, kh2po40.2g, na2hpo4.12h2o 2.9g, tween—20，0.5ml. 蒸馏水加至1000ml。
6. 洗涤液：同稀释液
7. 封闭液：0.5%鸡卵清蛋白，ph7.4 pbs。
8. 邻苯二胺溶液（底物）：临用前配制 0.1m 柠檬酸（2.1g/100ml）, 6.1ml 0.2mna2hpo4.12h2o （7.163g/100ml） 6.4ml, 蒸馏水12.5ml, 邻苯二胺10mg, 溶解后,临用前加30%h2o2 40 微升。
9. 终止液：2mol/lh2so4。
大鼠酸性成纤维细胞生长因子1(afgf-1)elisa试剂盒实验结束后，包括阳性对照、质控在内的所有板孔颜色均较淡。
1.试剂盒超过期， 超过有效期的产品可能会产生很弱的信号； 试剂盒没有按规定进行保存，受高温影响
2.试剂、样品用前未平衡至室温
3.加入试剂的体积和时间有误， 移 液器计量不准，吸嘴内水分太多或不清洁
4.洗板及加样过程中，酶标受污染失活而失去催化显色剂显色的能力
5.孵育时间及孵育温度未达到要求 ，反应板放入培养箱时注意温度并及时调整
6.洗板次数过多，或浓缩洗液稀释倍数不符合要求；洗涤冲击力太大。浸泡时间太长
7.显色剂加量不足或顺序颠倒，或混合后加入
8.底物作用时间不够
9.蒸馏水水质有问题
对策：
1.实验前检查试剂的组分及批号，确认试剂未过期。 不要将试剂盒长时间置于常温下，按使用规定储藏。
2.从低温冰箱中取出的试剂及样品应置室温平衡 20分钟左右。
3.确定所使用的试剂体积正确，加入时间适当。 校正移液器，移液器与吸嘴配合要紧密吻合。移液不宜太快，排放应完全
4.确认盛酶标的容器不含酶抑制剂如叠氮钠等，确认配制洗液的容器已洗干净，确认配制洗液的纯化水达到要求且未受污染
5.孵育温度应控制在 37-38℃，孵育时间严格按照说明书操作。 保温期内不宜多开门，以免影响保温
6.严格按说明书要求稀释浓缩洗液及洗板，减小洗涤冲击力，按说明书要求置留洗涤液时间和洗涤次数
7.显色剂滴瓶垂直向下，持力均匀，滴速不宜过快，先加显色剂?a，后加显色剂b，不可将a、b液混合后加入
8.准确定时
9.测定蒸馏水配制试剂对酶免疫法的影响