Gα13 GTP 武汉纽斯特生物公司

武汉纽斯特生物科技有限公司（wuhanneweastbiotechonologyco.ltd），系美国生命科学试剂供应商美国neweastbio在中国的子公司。美国neweastbio专注于生命科学和生物技术领域，主要产品有小分子、elisa试剂盒、蛋白等。

悬浮细胞

1.培养细胞并根据需要用活化剂或抑制l剂刺激。

2.进行细胞计数，然后通过离心沉淀细胞。

3.吸出培养基，并用冰冷的pbs洗涤两次。

4.完全除去pbs洗涤液，然后向细胞沉淀中加入冰冷的1x分析/裂解缓冲液

   （每1 x 107池0.5 – 1 ml）。

5.通过重复移液裂解细胞。

6.将裂解物转移至适当大小的试管中，并置于冰上。

7.如果发生核裂解，则细胞裂解液可能变得非常粘稠，难以移液。如果这

   发生时，裂解液可通过27?号注射l器针头3-4次以剪切

   基因组dna。

8.通过离心10分钟（在4°c下为12，000 x g）清除裂解物。

9.收集上清液并将样品保存在冰上以备立即使用，或速冻并保存在-

   70°c以备将来使用。

阳性和阴性对照的体外gtpγs/ gdp蛋白质上样量

    注意：体内刺激细胞会激l活大约10％的可用rab35，而

    体外gtpγs蛋白负载将激l活近90％的rab35。

1.将0.5 ml每种细胞提取物等分到两个微量离心管中（或使用1 μg纯化的rab35蛋白）。

2.向每个试管中加入20 μl 0.5 m edta（至20 mm终浓度）。

3.将5 μl 100 xgtpγs（至100 μm，终浓度）加到一个试管中（阳性对照）。

4.在第二个试管中加入5 μl 100 x gdp（至1 mm，终浓度）（阴性对照）。

5.在搅拌下将试管在30°c孵育30分钟。

6.通过将试管放在冰上并添加32.5 μl 1 m mgcl2（至60 mm）。

目前还没有直接测定arl1-gtpase活性的方法。neweastbiosciences arl1激l活检测试剂盒是基于特定构型的单克l隆抗l体特异性识别arl1 gtp，但不识别arl1gdp的抗l体。鉴于克l隆抗l体对其抗原，活化试验可在短时间内进行。这个分析结果可靠，重现性一致。

这些抗arl1-gtp单克l隆抗l体也可用于监测细胞中arl1的激l活免l疫组织化学检测。neweastbiosciences arl1激l活分析试剂盒提供了一种简单、快速的方法来监测激l活arl1。每个试剂盒提供足够的量来进行20次分析。

分析原理

neweast biosciences arl1激l活检测试剂盒基于配置特异性抗arl1-gtp从细胞提取物或体外检测活性arl1-gtp水平的单克l隆抗l体gtpγs负载arl1活化分析。简而言之，抗活性arl1小鼠单克l隆抗l体将用含有arl1-gtp的细胞裂解液培养。然后，gα13-gtp，绑定的活动arl1将被下拉蛋白质a/g琼脂糖。用抗arl1兔多克l隆抗l体或抗arl1小鼠单克l隆抗l体进行免l疫印迹分析，检测沉淀的活性arl1。

需要但未提供的材料

1刺激性和非刺激性细胞裂解物

2蛋白酶抑制素

4°c摇管器或振动筛

40.5 m edta，ph8.0

51百万氯化镁

62x还原sds-page样品缓冲液

7电泳和免l疫印迹系统

8免l疫印迹洗涤缓冲液，如tbst（10 mm tris hcl，ph 7.4，0.15 m nacl，0.05%

吐温-20）

9免l疫印迹阻断缓冲液（含5%脱脂奶粉或3%牛血l清白蛋白的tbst）

10pvdf或硝化纤维膜

11次级抗l体

12ecl检测试剂

gα13-gtp-武汉纽斯特生物公司由武汉纽斯特生物技术有限公司提供。“g蛋白活性,camp和cgmpelisa试剂盒,蛋白点突变”选择武汉纽斯特生物技术有限公司，公司位于：湖北省武汉市东湖新技术开发区高新大道666号光谷生物城b3-3栋3楼，多年来，武汉纽斯特坚持为客户提供好的服务，联系人：黄经理。欢迎广大新老客户来电，来函，亲临指导，洽谈业务。武汉纽斯特期待成为您的长期合作伙伴！